Выявление клональности лимфоцитов

В настоящее время этот тест широко используется для диагностики лимфопролиферативных заболеваний.

Лимфопролиферативные заболевания собак и кошек могут проявляться огромным количеством разнообразных клинических признаков, отражая различную природу клеток, дающих начало этим состояниям. Часто диагноз очевиден, и его можно поставить при цитологическом или гистологическом исследовании ткани, костного мозга или мазка крови. Однако на ранних стадиях лимфомы, когда злокачественные клетки составляют меньшую часть от общей популяции, а также в случаях, когда присутствуют мелкие, выглядящие доброкачественными, лимфоциты, могут потребоваться дополнительные диагностические исследования, чтобы установить окончательный диагноз.

diagnostika-onkologicheskikh-zabolevanij-u-sobak-i-koshek.jpg

Выявление клональности лимфоцитов (PARR)

Любой диагностический тест, который может показать, что группа клеток происходит от одной клетки, можно рассматривать как тест на клональность. Обычно этот термин используют при обнаружении уникальных генов рецепторов В- или Т-клеток: генов иммуноглобулинов В-клеток и генов Т-клеточного рецептора в Т-клетках. Фрагмент этих генов, кодирующий антиген-связывающий участок, является фрагментом, различающимся по размеру и последовательности у разных лимфоцитов.

По мере созревания и деления B- или T-клеток в ответ на контакт и стимуляцию антигеном, гены иммуноглобулинов и Т-клеточного рецептора передаются дочерним клеткам. В ходе нормального иммунного ответа разные В- и Т-клетки активируются в ответ на контакт с патогеном, каждая из них претерпевает клональную экспансию и затем погибает, оставляя после себя небольшое количество клеток памяти. Неопластической может стать одна единственная клетка, но поскольку ее рост и деление больше не контролируются, она может бесконечно размножаться, не требуя никаких сигналов, в отличии от клеток, размножающихся в процессе иммунного ответа.

Следовательно, если будет установлено, что большая часть клеток среди популяции лимфоцитов обладает одинаковым иммуноглобулиновым или Т-клеточным рецептором, можно заключить, что эти клетки, скорее всего, являются потомками одной единственной клетки, и они также являются злокачественными, а не реактивными. Ряд лабораторий в настоящее время использует этот тест в разных клинических ситуациях.

На практике тест на клональность чаще всего используется для различия реактивных (поликлональных) лимфоцитов от неопластических (моноклональных), если это различие сложно установить другим способом.

Говорит ли выявление клональной популяции о наличии лимфомы или лейкемии?

Поскольку тест на клональность может выявить 1 неопластическую клетку на 100 клеток, он дает возможность обнаружить неопластические лимфоциты раньше, чем цитологическое или гистологическое исследование. Поэтому для определения специфичности положительного (клонального) результата пациенты с положительным результатом, но без гистопатологических или цитологических свидетельств лимфомы должны наблюдаться в течение некоторого периода времени, чтобы понять, действительно ли наличие клональной популяции предсказывает о развитии лимфомы/лейкемии.

В лаборатории Университета Штата Колорадо были получены данные наблюдения за 141 собакой с положительными результатами теста на клональность, но без окончательного цитологического или гистологического диагноза, в течение года. У 6 % этих пациентов так и не появилось дополнительных свидетельств развития лимфомы в течение этого года, у оставшихся 94 % пациентов в течение года был поставлен диагноз лимфома или лейкемия. Единственным не неопластическим заболеванием у собак, при котором может появляться клональная экспансия лимфоцитов, является заражение Ehrlichia, и у 2 собак из 6 % пациентов с ложноположительными результатами серологически была подтверждена инфекция Ehrlichia. В остальных случаях у собак была выявлена ассоциация В-клеточной моноклональной экспании с болезнью Лайма, бартонеллезом и пятнистой лихорадкой Скалистых Гор (но не было получено окончательного доказательства, что именно эти заболевания вызвали клональную экспансию), а оставшиеся случаи были идиопатическими. Эти факты обязательно следует учитывать при назначении теста на клональность и интерпретации результатов этого теста.

Чувствительность данного теста на настоящий момент составляет около 85 % в подтвержденных случаях лимфомы или лейкемии. Ложноотрицательные результаты могут быть получены, поскольку вероятнее всего тест-система не может охватить все разнообразие ДНК генов иммуноглобулинов рецепторов. Также могут быть получены ложноположительные результаты в случаях инфекции, вызванной Ehrlichia canis, при плохом качестве выделенной ДНК.

Обобщая все выше указанное, можно заключить, что тест на клональность чаще всего используют:

А. Для обнаружения лимфопролиферативного заболевания (лимфомы, хронической лимфоидной лейкемии), если результаты цитологического или гистологического исследования не являются однозначными.

Б. Для ретроспективного поиска пренеопластических экспансий лимфоцитов.

В. Для определения природы лимфоцитов при лимфоме (Т- или В-клетки), что более актуально для собак, поскольку часто происхождение клеток влияет на лечение и прогноз для животного.

Тест на клональность не поможет, если нужно:

А. Провести иммунофенотипирование. Такое исследование проводят с помощью проточной цитометрии или иммуногистохимии.

Б. Определить стадию лимфомы.

В. Различить новообразования лимфоидной и миелоидной клеточных линий.

Это исследование нельзя использовать как скрининговый тест у здоровых животных.

16 июля 2015

© ООО Независимая ветеринарная лаборатория ПОИСК