Калицивирус кошек. Диагностика в лаборатории
Клинические симптомы могут различаться в зависимости от штамма калицивируса, возраста зараженной кошки, а также множества факторов. В некоторых случаях инфекция субклиническая, во многих других наблюдается типичный синдром, сопровождающийся изъязвлением языка и сравнительно легким острым респираторным заболеванием. В основном, такие симптомы наблюдаются у котят. Инкубационный период составляет от 2 до 10 дней.
Основными симптомами являются язвы в ротовой полости, чихание и серозные истечения из носа. Также отмечают лихорадку. Иногда анорексия сопровождается гиперсаливацией из-за язв в ротовой полости, локализующихся, в основном, на языке и гораздо более выраженных чем признаки ринита. В некоторых тяжелых случаях могут развиваться пневмония, проявляющаяся как одышка, кашель, лихорадка и подавленное состояние, особенно у котят. Этот вирус реже поражает другие ткани, такое заражение может привести к развитию пневмонии (очаговому альвеолиту, прогрессирующему до острой экссудативной пневмонии, а затем до пролиферативной интерстициальной пневмонии) и хромоты (острому синовииту, сопровождающемуся утолщением синовиальной мембраны и увеличению объема синовиальной жидкости). При этом вирусный антиген был идентифицирован в макрофагах синовиальной мембраны суставов.
Патогенез вирулентного системного заболевания, вызываемого кошачьим калицивирусом (VS-FCV) очень сильно отличается от описанной типичной картины. Такие штаммы вызывают обширный васкулит, вовлечение множества органов и смерть двух третей зараженных кошек. Вирус получает доступ к клеткам, которые обычно не поражаются. Поражения очень обширные и включают подкожные отеки, изъязвление ротовой полости, а также изъязвления различной степени тяжести на коже, особенно на ушных раковинах, подушечках лап и ноздрях. Другие поражения включают бронхоинтерстициальную пневмонию, а также некроз печени, селезенки и поджелудочной железы.
После окончания острой стадии заболевания у большинства кошек вирус сохраняется в организме еще в течении 30 дней, некоторые кошки выделяют вирус в окружающую среду гораздо дольше, возможно, что и всю оставшуюся жизнь. У таких клинически здоровых носителей вирус может локализоваться в эпителии миндалин.
Статус носительства калицивируса
Большинство кошек выделяют калицивирус в течение 30 дней после заражения. Носителями считаются такие кошки, которые выделяют вирус дольше. Отдельные животные могут выделять калицивирус всю жизнь, хотя большинство кошек все же спонтанно освобождаются от вируса.
Иммунитет
В первые недели жизни для защиты от вируса очень важны материнские антитела. В условиях эксперимента было показано, что примерное время полужизни материнских антител к калицивирусу составляет 15 дней, а сами антитела циркулируют в крови котят 10-14 недель. Однако в обычных условиях у 20 % котят в возрасте шести недель уже не выявляется антител против широко используемого вакцинного штамма.
У взрослых кошек приблизительно через 7 дней после заражения появляются нейтрализующие вирус антитела. Также показано, что кошки могут быть защищены и в отсутствии детектируемого уровня вирус-нейтрализующих антител, что предполагает наличие других иммунных механизмов. Также калицивирус-специфические IgG и IgA антитела были обнаружены в слюне животных, хотя их значимость при защите организма еще не известна.
Диагностика
В силу того, что существует бессимптомная стадия носительства, и факта, что вирусы из живых вакцин иногда могут выделяться после вакцинации, следует с осторожностью интерпретировать любой положительный результат на наличие калицивируса методом ПЦР при отсутствии корреляции между наличием вируса и клиническими признаками.
Диагностика VS-FCV опирается на клинические признаки, высокую контагиозность и высокий уровень смертности, а также выделение одного и того же штамма из крови нескольких зараженных кошек, что оценивается с помощью установления нуклеотидной последовательности гипервариабельных участков гена капсида вируса.
Для обнаружения РНК калицивируса кошек в конъюнктивальных смывах и смывах ротовой полости, крови, кожных соскобах или ткани легких (в зависимости от клинической картины) применяется ПЦР с обратной транскриптазой.
Диагностическая чувствительность ПЦР зависит от используемой тест-системы и штамма вируса, вызвавшего заболевание, поскольку генетическое разнообразие штаммов калицивируса кошек очень высоко. Поэтому молекулярный анализ следует оптимизировать таким образом, чтобы свести к минимуму процент ложноотрицательных ответов.
Выделение вируса
Выделение вируса является полезным методом для обнаружения калицивируса кошек. Положительный результат свидетельствует о наличии реплицирующегося вируса. Еще одно преимущество этого метода заключается в том, что метод менее чувствителен к эффекту генетического разнообразия штаммов, чем ПЦР. Но такой анализ не является рутинным и в большинстве лабораторий не проводится.
Серология
Антитела к калицивирусу кошек можно обнаружить в процессе нейтрализации вируса или с помощью ИФА. Поскольку распространенность антител в популяции довольно высокая в силу природной встречаемости с вирусом и вакцинации, наличие специфических антител не помогает само по себе поставить диагноз.
Уровень антител можно использовать для того, чтобы определить, защищена ли кошка или нет, но иногда могут быть получены ложноотрицательные результаты, если антитела не реагируют перекрестно с лабораторными штаммами, используемыми при тестировании. Также титры могут быть выше, когда образуются гомологичные, а не гетерологичные пары вирус-антитело.
Независимая Ветеринарная Лаборатория «Поиск» рада предложить вам следующие тесты для диагностики калицивируса:
1. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) с обратной транскриптазой. С помощью этого метода в образцах выявляется наличие РНК калицивируса кошек. Тест-система в нашей лаборатории позволяет обнаружить около 17 различных штаммов калицивируса. Показаниями к проведению теста является клиническая картина, соответствующая заболеванию. Не следует проводить этот тест в течении полутора месяцев после вакцинации и просто так у животных без каких-либо симптомов. Исключение составляют животные, у которых необходимо выявить статус носительства при введении в питомник. Материалом для исследования служат конъюнктивальные и назальные смывы, соскобы язв из ротовой полости, кожные соскобы и кровь (ИСКЛЮЧИТЕЛЬНО при подозрении на VS-FCV).
2. Проверка напряженности иммунитета с помощью бесприборных тестов VacciCheck®. Этот набор разработан для определения сывороточного титра IgG к вирусу панлейкопении (FPLV), вирусу герпеса (FHV) и калицивирусу (FCV). Основной задачей этого набора является оценка статуса иммунизации животного в отношении этих трех патогенов. Тест можно применять для кошек в разных ситуациях, учитывая особенности интерпретации результатов в каждом конкретном случае. Материалом для исследования служит сыворотка крови или цельная кровь.