Определение прогестерона (флуоресцентный иммуноанализ)

Прогестерон (P4) — это стероидный гормон, относящийся к группе прогестагенов. Благодаря своему разностороннему воздействию на организм, особенно на матку, он необходим для наступления и поддержания беременности. 
Основным источником прогестерона является желтое тело яичника. При овуляции фолликулярные клетки лютеинизируются и превращаются в желтые тела, которые вырабатывают прогестерон. Выработка прогестерона изменяется в зависимости от стадии цикла.
• У собак – секретирует стенка растущего фолликула (частично лютеинизированная (прорастает клетками, секретирующими прогестерон) до овуляции) и желтые тела яичников (после овуляции).
• У кошек только желтые тела яичников (после овуляции).
Эстральный цикл представляет собой последовательность взаимосвязанных изменений, происходящих как в яичниках, матке, влагалище, так и в поведении животного. Половой цикл состоит из нескольких стадий: проэструс и эструс (течка и овуляция), диэструс (беременность или псевдобеременность) и анэструс (покой).
Эстральный цикл регулируется следующими эндокринными процессами:
• Основной контроль обеспечивают гипоталамус и гипофиз;
• Яичники вырабатывают стероидные гормоны — эстрогены (главным образом эстрадиол) и прогестерон;
• Половые гормоны воздействуют на репродуктивный тракт, добавочные половые железы и участки мозга, управляющие репродуктивным поведением.
 
Во время течки у сук начинается рост фолликулов яичников, в первую половину течки они растут и выделяют эстрагены, далее, когда фолликулы достигают определенного размера, эстрагены достигают пика своей концентрации в крови. Это дает сигнал, что наступило время овуляции (выходу яйцеклетки), к концу пика эстрагенов, стенка фолликула начинает прорастать слоем клеток, которые выделяют уже прогестерон (происходит частичная лютеинизация фолликулов, что уникально для собак). Когда наступает пик эстрагенов и начинается уже выработка прогестерона, происходит пик выброса лютеинизирующего гормона (ЛГ) гипофизом. Выброс ЛГ запускает окончательный процесс дозревания фолликулов и происходит процесс овуляции. Пиковый выброс ЛГ и последующая овуляция у сук возникают спонтанно, тогда как у кошек для запуска пикового выброса ЛГ обычно требуется стимуляция влагалища во время спаривания. В момент овуляции начинают формироваться ранние желтые тела, после овуляции они изнутри начинают быстро прорастать тек-клетками, секретирующими прогестерон. В этот момент будет резкий подъем прогестерона, не такой плавный как до овуляции.  Овуляция в среднем длится 12-24 часа у собак. Овулирует из фолликула не зрелая яйцеклетка, ей нужно дозреть 2-3 дня в маточных трубах для приема спермы.
В стадию диэструса (беременности или небеременности) основную функцию секреции стероидных гормонов на себя берут жёлтые тела. Если произошло оплодотворение, длительность диэструса будет равна длительности беременности. Беременность длится в среднем 65 дней у кошек и 63 дня после вязки у сук. Если оплодотворения у кошки не произошло, желтое тело регрессирует за 36-38 дней. Другими словами, длительность существования желтого тела зависит от наличия беременности жизнеспособным плодом, и наоборот. Сука, с другой стороны, среди других обычных домашних животных уникальна тем, что у нее желтое тело сохраняется и вырабатывает прогестерон в течение 2 месяцев и дольше независимо от состояния беременности. Желтые теласекретируют прогестерон в зависимости от своей стадии развития. Сначала он постепенно растет, выходит на плато, затем начинает снижаться. К концу беременности или небеременности он должен оказаться на базальном уровне. Многочисленные исследования показали отсутствие достоверных различий в средней концентрации прогестерона в сыворотке крови беременных сук и небеременных сук во время диэструса. Поэтому по концентрации гормона в сыворотке крови нельзя установить, наступила беременность или нет. Далее желтые тела постепенно рассасываются и либо наступают роды (при беременности), либо начинается стадия анэструса(половой покой).
 
Действие прогестерона:  
• Вызывает развитие альвеол молочных желез,способствуя выработке молока.

• Стимулирует рост и секреторную активность желез эндометрия и подавляет сократительную способность миометрия.
• Способствует поддержанию плаценты в прикрепленном к эндометрию состоянии.
• В гипоталамусе снижает амплитуду и частотусекреторных всплесков базального гонадотропин-рилизинг-гормона (ГнРГ),предотвращает следующий эстральный цикл и подавляет преовуляторный выброс ЛГ.
• Повышенные концентрации прогестерона подавляют лактацию во время беременности, и препятствуют началу родовой деятельности.
Для выявления прогестерона используется широкий спектр методов лабораторных исследований. Сюда входят РИА, который считается золотым стандартом, а также иммуно-хемилюмисцентный анализ (ИХЛА). При использовании методов ИХЛА получаются более низкие значения, чем при использовании РИА. Следовательно, важно использовать референсные диапазоны, установленные лабораториями для применяемого ими метода, и валидированные для использования у конкретных видов животных.
Показания для определения концентрации прогестерона в крови:
• Оценка аспектов функционирования яичника у сук и кошек.
• Определение времени овуляции для определения времени вязки у сук
• Предсказание даты родов у сук
• Подтверждение овуляции
• Подтверждение наличия остатка ткани яичника
• Оценка функции желтого тела в случаях аборта (самопроизвольного или мониторинг ответа на абортивные лекарственные средства)
• Выявление бессимптомной течки
• Выявление наличия лютеиновых кист
Охлаждение свежевзятой крови может снижать концентрацию прогестерона в сыворотке крови, перед охлаждением кровь необходимо выдержать при комнатной температуре в течении 2 часов. Прогестерон не стабилен после контакта с гелем для отделения сыворотки, также стабильность снижается при продолжительном контакте с эритроцитами.
Возможные патологические изменения:
Значения, превышающие базальные референсные уровни конкретной лаборатории, не должны выявляться у самок, которым была проведена овариоэктомия. Получение таких данных должно наводить на подозрения о наличии остатков тканей яичника.
Значения, превышающие базальные референсные уровни конкретной лаборатории, не должны выявляться у самцов. Получение таких данных может позволить заподозрить опухоль семенника, продуцирующую прогестерон.
Факторы, влияющие на результаты теста:
1. Препараты – экзогенные и эндогенные стероидные гормоны, могут давать определенную перекрестную реакцию с некоторыми анализами, выявляющими прогестерон.
2. Экзогенные прогестины, эстроген и тестостерон подавляют выделение ЛГ и, вследствие этого, секрецию прогестерона.
Высокие значения:
• Функционирующее желтое тело
• Оставшиеся ткани яичника
• Лютеиновые кисты
Низкие значения:
• Нормальный анэструс
• Овариогистерэктомия
• Непроизошедшая овуляция
• Преждевременный лютеолиз
Клиническое применение:
Начальное повышение концентрации выше исходной, анэстральной концентрации, совпадает одновременно с пиковым выбросом ЛГ у сук. Для выявления начального подъема пробы следует брать каждые 2-3 дня, начиная с проэструса. Выявление высокой концентрации прогестерона указывает на наличие функционирующего желтого тела. Концентрация прогестерона ниже ожидаемой для данной стадии беременности указывает на вероятность возникновения аборта или приближающиеся роды.